Bcap-37人乳腺癌細胞實驗操作步驟

　　Bcap-37人乳腺癌細胞實驗操作步驟：
 

　　在完成Bcap-37人乳腺癌細胞的復蘇與傳代后，下一步是進行細胞接種與藥物處理實驗。以下是具體的操作流程：
 

　　1. 細胞計數與接種
 

　　- 使用血球計數板或自動細胞計數儀對懸浮的Bcap-37細胞進行計數，調整細胞密度至所需濃度(通常為5×10?~1×10? cells/mL)。
 

　　- 根據實驗設計，將細胞均勻接種于6孔板、96孔板或其他培養器皿中，每孔加入適量培養基(如DMEM+10% FBS)，確保細胞分布均勻。
 

　　2. 藥物處理
 

　　- 待細胞貼壁并生長至60%~70%匯合度時(約24小時后)，進行藥物處理。
 

　　- 根據實驗方案配制不同濃度的待測藥物(如化療藥物或靶向抑制劑)，用無菌PBS或培養基稀釋至工作濃度。
 

　　- 小心吸除原培養基，避免擾動細胞層，隨后加入含藥物的新鮮培養基，同時設立空白對照組(僅加培養基)和溶劑對照組(如DMSO)。
 

　　3. 培養與觀察
 

　　- 將培養板置于37℃、5% CO?培養箱中繼續培養，分別在24h、48h或72h等時間點觀察細胞狀態。
 

　　- 使用倒置顯微鏡記錄細胞形態變化，注意是否有凋亡(如細胞變圓、脫落)或壞死(如碎片增多)現象。
 

　　4. 后續檢測
 

　　- 根據實驗目的，可選擇MTT法檢測細胞活力，或通過Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術分析凋亡率。
 

　　- 若需提取蛋白或RNA，需在藥物處理后及時裂解細胞，避免降解。
 

　　注意事項
 

　　- 藥物濃度需通過預實驗確定，避免過度毒性或無效劑量。
 

　　- 操作時嚴格無菌，防止污染影響結果。
 

　　- 每組實驗建議設置3個復孔，確保數據可靠性。
 

　　通過以上步驟，可系統評估藥物對Bcap-37細胞的抑制作用，為后續機制研究提供基礎數據。