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對(duì)熒光-PCR法的擴(kuò)增曲線的解讀

更新時(shí)間:2022-03-11點(diǎn)擊次數(shù):887
   熒光-PCR法技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評(píng)價(jià);臨床疾病診斷動(dòng)物疾病檢測(cè);食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因研究等食品安全操作等等各個(gè)領(lǐng)域。目前的實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)主要是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的原理,一對(duì)合適的熒光物質(zhì)可以構(gòu)成一個(gè)能量供體(donor)和能量受體(acceptor)對(duì),其中供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜重疊,當(dāng)它們?cè)诳臻g上相互接近到一定距離(1-10 nm)時(shí),激發(fā)供體而產(chǎn)生的熒光能量正好被附近的受體吸收,使得供體發(fā)射的熒光強(qiáng)度衰減,受體熒光分子的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
  熒光-PCR法試劑盒具有高特異性,與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;檢測(cè)靈敏度可達(dá)10-100拷貝;操作簡(jiǎn)便,該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
  熒光-PCR法的擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。在qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期,PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入平臺(tái)期,在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,只有在熒光信號(hào)的指數(shù)增長(zhǎng)期,PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。

TEL:021-61210612

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