探討大鼠ELISA試劑盒應(yīng)用時的檢測程序

　　大鼠ELISA試劑盒試驗時制備試劑與收集血樣：

　　1.收集標本

　　血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。正常標本測定前用標本稀釋液作1：10稀釋。

　　2.標準品液配制

　　使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成10ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管，1管加標本稀釋液900ul，2-8管加入標本稀釋液500ul。在1管中加入10ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至2管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第7管中吸出500ul棄去。第2管為空白對照。

　　3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1：10倍稀釋（1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

　　4.洗滌液：用重蒸水1：20稀釋（1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）。

　　相關(guān)檢測程序：

　　1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘；

　　2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干；

　　3.每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘；

　　4.洗板：同前；

　　5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘；

　　6.洗板：同前；

　　7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘；

　　8.每孔加入100ul終止液混勻；

　　9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。