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小鼠ELISA試劑盒的抗原抗體反應簡析

更新時間:2021-04-13點擊次數:1446
   小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法,單抗包被于酶標板上,標本和標準品中的小鼠試劑會與單抗結合,游離的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠試劑抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素,生物素與親和素特異性結合;抗小鼠試劑抗體與結合在單抗上的小鼠試劑結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應孔中有小鼠試劑,辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現藍色,加終止液變黃。在450 nm處測OD值,小鼠試劑濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標準曲線求出標本中小鼠試劑的濃度。
  小鼠ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。
  ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。
  溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達頂值。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成最多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒中一般不予采用。

TEL:021-61210612

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