小鼠ELISA試劑盒使用對標準品的稀釋與加樣

更新時間：2022-05-13

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　　小鼠ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白細胞介素水平。用純化的小鼠白細胞介素8抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素，再與HRP標記的白細胞介素8抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素8呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素濃度。

　　小鼠ELISA試劑盒標準品的稀釋與加樣：

　　在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在一、二孔中分別加標準品100μl，然后在一、二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；

　　然后從一孔、二孔中各取100μl分別加到三孔和四孔，再在三、四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；

　　然后在三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到五、六孔中，再在五、六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；

　　混勻后從五、六孔中各取50μl分別加到七、八孔中，再在七、八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從七、八孔中分別取50μl加到九、十孔中，再在九、十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從九、十孔中各取50μl棄掉。

　　加樣時分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。